便攜式三聚氰胺檢測(cè)儀/酶標(biāo)儀 型號(hào):HAD-MB100
產(chǎn)品描述 檢測(cè)方法 HAD-MB100便攜式三聚氰胺檢測(cè)儀，利用酶聯(lián)**吸附測(cè)定法用食品及飼料中三聚氰胺的定量測(cè)定。 檢測(cè)原理 HAD-MB100便攜式三聚氰胺檢測(cè)儀，酶聯(lián)**吸附測(cè)定法定量測(cè)定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過(guò)均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺行**測(cè)定。將三聚氰胺酶標(biāo)記物，樣品萃取物及標(biāo)準(zhǔn)加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開(kāi)始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過(guò)程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒(méi)有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。在用去離子水清洗結(jié)束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。孵育30分鐘后停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。 實(shí)驗(yàn)所需設(shè)備及材料 三聚氰胺檢測(cè)試劑盒（目前常用口試劑有美Abraxis公司和美Beacon公司的） 318C酶標(biāo)儀臺(tái)或HAD-MB100便攜式三聚氰胺檢測(cè)儀（配有450nm濾光片） 1－5ml可調(diào)移液器 100－1000ul可調(diào)移液器. 20－200ul可調(diào)移液器. 蒸餾水或去離子水.. 可吸取50ul的移液器及吸頭. 可吸取50ul和100ul的八道移液器及吸頭. 吸水紙或相當(dāng)?shù)奈牧? 450nm的酶標(biāo)儀. 計(jì)時(shí)器. 洗瓶 混旋器. 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml. 注意事項(xiàng) *配套使用試劑，不要同其它公司的產(chǎn)品混用，不要將不同批次的產(chǎn)品混用。 樣品稀釋或含有雜質(zhì)很可能對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確性有影響。 不要使用過(guò)期的產(chǎn)品。 使用之前將所有試劑回升至室溫，但不要放置過(guò)24小時(shí)。 三聚氰胺屬于有毒性的化學(xué)品，請(qǐng)小心處理。 停止液是1N鹽酸，避免接觸*膚。 樣品制備（以美Beacon試劑為例） 濕的寵物食品萃取方法（稀釋倍數(shù)：100） 均質(zhì)樣品至布丁狀。 稱(chēng)取2g樣品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并劇烈振蕩。 聲萃取1分鐘。 漩渦混合1分鐘，然后靜置5分鐘，使樣品分層。 3000 g 室溫離心5分鐘。 用玻璃纖維濾紙過(guò)濾上清液，并將萃取液收集于干凈試管中。 用樣品稀釋液將濾液20倍稀釋?zhuān)ㄈ纾?.1mL濾液+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS） 移取150 ul 行分析。 注意：用此方法測(cè)定了8個(gè)添加有15ppm三聚氰胺的貓糧（非要求召回），回收率范圍為75%-117%。 本方法只可作為樣品篩選方法，不可作為*終確認(rèn)方法。 小麥面筋蛋白萃取方法：（稀釋倍數(shù)：500） 1.均質(zhì)或混勻小麥面筋蛋白樣品。 2.稱(chēng)取0.2g均質(zhì)好的樣品加入10mL 酸化的60%甲醇/水溶液(1mL 1N HCl/ 100mL 60%甲醇/水)。 3.漩渦混合并聲萃取，使樣品溶解（確保樣品中沒(méi)有結(jié)塊）。 4.用樣品稀釋液稀釋萃取液按照1:10比例。（0.5mL+4.5mL 10%MeOH/20 mM PBS）。 5.10000轉(zhuǎn)/分離心上清液10分鐘。 6.用G6玻璃纖維濾紙過(guò)濾上清液，并將萃取液收集于干凈試管中。 7.移取150 ul 行分析。 注意：如果樣品中含有大量的添加物，需要加入更大量的萃取溶液，以保證萃取效率。 操作人依據(jù)自己的判斷力，如果測(cè)試結(jié)果，需要加入兩倍的萃取溶液（0.2/20mL），行二次測(cè)定。 干的寵物食品萃取方法（稀釋倍數(shù)：200） 1.質(zhì)器均質(zhì)干的寵物飼料樣品。 2.稱(chēng)取1g樣品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并劇烈振蕩。 3.聲萃取1分鐘。漩渦混合1分鐘，然后靜置5分鐘，使樣品分層。 4.3000 g 室溫離心5分鐘。 5.用G6玻璃纖維濾紙過(guò)濾上清液，并將萃取液收集于干凈試管中。 6.用樣品稀釋液將濾液20倍稀釋?zhuān)ㄈ纾?.1mL濾液+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS） 7.移取150 ul 行分析。
**測(cè)定過(guò)程 (注意: 標(biāo)準(zhǔn)及樣品*做平行試驗(yàn)以增加準(zhǔn)確度) 將所有試劑及樣品回升至室溫20-280C，但不要放置過(guò)24小時(shí)。 從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮 吸取150ul標(biāo)準(zhǔn)、樣品到對(duì)應(yīng)微孔中，須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。加入50ul三聚氰胺酶標(biāo)記溶液到每個(gè)小孔中。 混合60秒，20-28攝氏度下孵育30分鐘。 將微孔中的溶液倒入水槽中，用蒸餾水充滿(mǎn)微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板。 在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干。 每個(gè)微孔中加入100ul底物溶液。 20-28攝氏度下，孵育30分鐘。 每個(gè)微孔中加入100ul停止液。 450nm下讀板。 結(jié)果分析 HAD-MB100便攜式三聚氰胺檢測(cè)儀，半定量的結(jié)果是由樣品的吸光率與標(biāo)準(zhǔn)的吸光率的簡(jiǎn)單對(duì)比而來(lái)判定:樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色淺則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度, 樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色深則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度低。 定量分析需要繪制以標(biāo)準(zhǔn)樣的吸光率為X軸,以標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度的半對(duì)數(shù)為Y軸的曲線(xiàn)圖.依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣吸光率的點(diǎn)畫(huà)成直線(xiàn),如此樣品的光吸收率可在線(xiàn)上找到,與此相對(duì)應(yīng)的Y軸則為樣品的濃度,樣品光吸收率范圍應(yīng)比標(biāo)準(zhǔn)樣的*底范圍,比*范圍低, 即可說(shuō)明此樣品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。 HAD-MB100便攜式三聚氰胺檢測(cè)儀操作步驟： 試劑盒大同小異； １．將樣品用甲醇或水提取，離心 ２．將試劑盒梅標(biāo)板室溫下回溫至少個(gè)小時(shí) ３．提取液＼標(biāo)準(zhǔn)１５０微升，移入酶標(biāo)板井 ４．加入ＨＲＰ５０微升 ５．震動(dòng)，反應(yīng)３０分鐘 ６．倒掉反應(yīng)液，用清洗液沖洗４次，吸水紙吸水 ７．加入色原底物１００微升，放置３０分鐘 ８．加入終止液１００微升， ９．１５分鐘后４５０ｎｍ下比色 １０．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算三聚氰胺的濃度 試劑盒，酶標(biāo)儀４５０ｎｍ，１０００微升＼２００微升、５０微升移液槍和八道移液槍?zhuān)垼瑯岊^等。 注意移液時(shí)間和避免交叉污染。每次要有標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。 網(wǎng)址:www.51658042.com
